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產(chǎn)品名稱(chēng):
Pfu DNA Polymerase
產(chǎn)品型號(hào):
JX033
產(chǎn)品展商:
晶欣生物
產(chǎn)品文檔:
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Pfu DNA Polymerase簡(jiǎn)稱(chēng)Pfu酶，是最常用的高保真DNA聚合酶之一。
Pfu DNA Polymerase是一種來(lái)源于嗜熱菌Pyrococcus furiosus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量為90kDa。Pfu酶可以催化5'至3'方向的依賴(lài)于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5'至3'外切酶活性，但Pfu酶沒(méi)有反轉(zhuǎn)錄酶活性。
由于Pfu酶有3'至5'的外切酶活性，因此在PCR擴(kuò)增過(guò)程中出錯(cuò)的幾率大大降低，出錯(cuò)率為2.6×10-6per nt per cycle。Pfu的出錯(cuò)率不僅遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶通常作為首先的高保真DNA聚合酶。
來(lái)源：本Pfu DNA Polymerase為recombinant Pfu DNA Polymerase，通過(guò)大腸桿菌表達(dá)純化獲得，和純化獲得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。
用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、點(diǎn)突變、雙平端PCR克隆等。
Pfu酶擴(kuò)增出來(lái)的DNA片斷為雙平端，可以用于雙平端克隆，但不能用于常規(guī)的T載體克隆。
dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介導(dǎo)的PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction(adsorbed on DE-81)in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v)Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿(mǎn)足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。
酶儲(chǔ)存溶液：20 mM Tris-HCl(pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10×Pfu Buffer(with Mg2+)：200 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA.。
失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Pfu酶失活。
